Kanuni za Mchanganyiko wa Asidi ya Nucleic

Usanisi wa asidi ya nukleiki unafanywa kwa kutumia njia dhabiti ya awamu ya sialic amide triglyceride, ambapo mwisho wa 3′ wa DNA hausogezwi kwenye sehemu ndogo ya awamu na nyukleotidi huongezwa katika mwelekeo wa 3′ hadi 5’ hadi kipande cha DNA kinachohitajika kitengenezwe. .Hii inatofautiana na usanisi wa DNA kwa utumiaji wa DNA polymerase.

Mwisho wa 3′ wa msingi wa kwanza haujahamishwa kwenye CPG wakati wa usanisi, 5′-OH ya msingi unaofuata inalindwa na di-p-tolyl trityl DMT, kikundi cha amino kwenye msingi kinalindwa na asidi ya benzoic na 3′. -OH basi inaamilishwa na kiwanja cha amino phosphate.Msingi 1 wa 5 5'-OH ya msingi 1 na 3'-OH ya msingi unaofuata huunda phosphite triglyceride, ambayo inaoksidishwa na iodini hadi triglyceride ya fosfeti, kinga kwenye msingi wa pili 5'-OH huondolewa na kuongeza mizunguko ya asidi ya dichloroacetic ya DM kupitia uongezaji wa msingi unaofuata, na baada ya usanisi kinga kwenye 5′-OH huondolewa na asidi dhaifu Kipande hicho kimetenganishwa kutoka kwa resin dhabiti na hidroksidi ya amonia iliyokolea, kinga huondolewa kutoka kwa msingi. na hidroksidi ya amonia iliyojilimbikizia inapokanzwa, hidroksidi ya amonia huondolewa, kipande kinakaushwa na utupu, na asidi ya nucleic husafishwa na chromatography ya kioevu au PAGE.

Hatua za Oligo Synthesis

Inazuia

TheKikundi 5 cha mwisho cha kulinda DMT kinaondolewa kwa kuongeza suluhisho la TCA.

Uwezeshaji

Kuchanganya kiamsha na monoma ya oligonucleotide kuunda monoma amilifu ya oligonucleotide ya kati.

Kuunganisha

Kikundi cha hidroksili cha 5-terminal humenyuka na oligonucleotidi amilifu ya kati katika mmenyuko wa kinza-uzazi wa msongamano kuunda dhamana ya triglyceride ya phosphite isiyo imara.

Kuweka kofia 

Kuongezewa kwa wakala wa capping hufanya mmenyuko wa capping ya acetylation na makundi ya ziada ya hidroksili ambayo hayahusiki katika mmenyuko wa condensation.

Oxidation 

Ongezeko la mmumunyo wa iodini ulio na maji humenyuka pamoja na viunga vya fosfiti isiyo imara kwa oxidation ili kuunda vifungo vya triglyceride vya asidi ya fosforasi.

Uharibifu wa Cyanoethyl

Bidhaa ya asidi ya nucleic baada ya awali, pamoja na kuongeza ya ufumbuzi wa DEA ili kuondoa kikundi cha cyanoethyl kutoka kwa dhamana ya triglyceride ya phosphate.

Imepasuka&Kinga

Vipande vya asidi ya nucleic hupasuka kutoka kwa carrier wa awamu imara kwa kuongeza ufumbuzi wa hidroksidi ya amonia na kisha huwashwa moto ili kuondoa vikundi vya kulinda kutoka kwa vifungo vya hidrojeni vya besi.