Kanuni ya msingi ya awali ya DNA

Usanisi wa DNA wa kemikali unatokana na mkakati wa usanisi wa awamu dhabiti na kemia ya phosphoramidite.Tofauti na usanisi wa DNA ya kibaolojia, nyenzo katika usanisi wa DNA ya kemikali ni DMT (4, 4-dimethoxytrityl) na phosphoramidite iliyorekebishwa ya deoxyriboxyside, kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 1. Usanisi wa DNA unafanywa kwa usaidizi thabiti (tunaweza kutoa anuwai yaSafu ya Awali ya Oligo), yaani CPG (kioo cha pore kinachodhibitiwa) na PS (polystyrene), na usanisi wote unafanywa kwenyeKisanishi cha DNA/RNA, ambayo ni kifaa chetu kikuu, ina modeli tofauti kama vile: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 na kadhalika, mwelekeo wa usanisi ni kutoka 3' hadi 5', na nyukleotidi huletwa kwa usaidizi thabiti kupitia moja. mzunguko wa awali.Mzunguko wa kawaida wa awali una hatua nne, Kuzuia, Kuunganisha, Kuweka na Oxidation (Mchoro 2).Kinga imewekwa ili kuondoa kikundi cha DMT kwenye usaidizi thabiti au kikundi cha 5' hidroksili kwenye nucleoside iliyotangulia, asidi ya trikloroasetiki ya 3% katika dichloromethane hutumiwa kama kitendanishi cha kuzuia kinga.Kisha phosphoramidite iliyorekebishwa deoxyriboxyside iliruhusiwa kufichua kikundi cha haidroksili kwa usaidizi wa kiamsha, yaani 5-ethylthiotetrazole au 4, 5-dicyanoimidazole, kutengeneza phosphitetriester (III), na kutambua hatua ya Kuunganisha.Hatua ya Kufunga inafanywa ili kuzuia kikundi cha hidroksili ambacho hakijashughulikiwa wakati wa hatua ya kuunganisha, ili kupunguza uundaji wa mlolongo wa kasoro zisizohitajika.Hatimaye, phosphitetriester isiyo imara (III) inaoksidishwa hadi phosphortriesta thabiti ya kemikali (V) na iodini kama kioksidishaji katika pyridine ya sasa.

DNA iliyounganishwa inaweza kupasuliwa kutoka kwa usaidizi thabiti kwa aminolysis, kikundi kilicholindwa cha 2-cyanoethyl kwenye phosphortriester na amide kwenye nucleobase inapasuliwa kwa wakati mmoja, Sahani za Mchanganyiko na Nguzo za Usanisi katika rafu huwekwa moja kwa moja kwenye chumba cha athari. yaVifaa vya Kulinda.DNA ghafi inaweza kutayarishwa na HPLC, electrophoresis na OPC inapohitajika, tunaweza pia kukupaVifaa vya Kusafishakwa Baada ya usindikaji.